1.原理

該方法用于特異性檢測(cè)纖維素酶制劑中的葡聚糖酶（內(nèi)切纖維素酶）。孵育染色的纖維素和纖維素酶，底物通過內(nèi)部作用被解聚產(chǎn)生低分子量的染色片段，之后在反應(yīng)混合物中加入沉降劑，通過離心方法去除大分子量物質(zhì)，測(cè)定上清液的顏色，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線可以確定分析溶液中的內(nèi)切纖維素酶。

2．底物

底物采用的是部分解聚的染色的羧甲基纖維素-4M，用藍(lán)色染料R染色多聚糖，大約1個(gè)染料分子連接20個(gè)糖基。

3．溶解

將2g粉狀底物加入到帶加熱板和磁力攪拌棒攪拌的80mL劇烈沸騰的水中，之后關(guān)閉加熱板，繼續(xù)攪拌直到溶液/漿液勻質(zhì)（大約20分鐘），再加入5mL乙酸鈉緩沖液（2M，pH4.5），冷卻溶液到室溫。調(diào)節(jié)pH為4.5，定容到100mL。該溶液可以儲(chǔ)存在4℃下，在此條件下，并且不被內(nèi)切纖維素酶污染時(shí)，該溶液可以穩(wěn)定保存至少12個(gè)月。下次使用前，劇烈震蕩儲(chǔ)存瓶子將底物溶液混合。該溶液是粘性的，應(yīng)用容積式移液器移取（如Eppendorf Multipette® with a 5.0 mL Combitip）。